ilvmНормативно-правовое регулирование в ветеринарииLegal regulation in veterinary medicine2782-6252SpbGUVM Publishing House10.52419/issn2782-6252.2023.4.46ilvm-660Research ArticleРЕЗУЛЬТАТЫ НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ В ВЕТЕРИНАРИИ. ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИRESULTS OF SCIENTIFIC RESEARCH IN VETERINARY MEDICINE: INFECTIOUS DISEASESХранение штамма Bacillus anthracis методом низкотемпературной консервацииStorage of Bacillus anthracis strain using low temperature preservation methodРодионовА. П.RodionovA. P.

Родионов Александр Павлович, канд.ветеринар.наук,

Alexander P. Rodionov, PhD of Veterinary Sciences

ИвановаС. В.IvanovaS. V.

Иванова Светлана Викторовна, канд.биол.наук

Svetlana V. Ivanova, PhD of Biological Sciences

СайфуллинА. С.SayfullinA. S.

Сайфуллин Алмаз Саубанович, канд.биол.наук

Almaz S. Sayfullin, PhD of Biological Sciences

ХусаиновИ. Т.KhusainovI. T.

Хусаинов Ильнур Тагирович

Ilnur T. Khusainov 

ДуплеваЛ. Ш.DuplevaL. Sh.

Дуплева Лилия Шамиловна, канд.биол.наук

Liliya Sh. Dupleva, PhD of Biological Sciences

МельниковаЛ. А.MelnikovaL. A.

Мельникова Лилия Арсентьевна, канд.ветеринар.наук

Liliya A. Melnikova, PhD of Veterinary Sciences

АртемьеваЕ. А.ArtemyevaE. Al.

Артемьева Елена Александровна, канд.ветеринар.наук

Elena Al. Artemyeva, PhD of Veterinary Sciences

Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасностиРоссияFederal Center for Toxicological, Radiation and Biological SafetyRussian Federation202319012024044650Copyright © Родионов А.П., Иванова С.В., Сайфуллин А.С., Хусаинов И.Т., Дуплева Л.Ш., Мельникова Л.А., Артемьева Е.А., 20232023Родионов А.П., Иванова С.В., Сайфуллин А.С., Хусаинов И.Т., Дуплева Л.Ш., Мельникова Л.А., Артемьева Е.А.Rodionov A.P., Ivanova S.V., Sayfullin A.S., Khusainov I.T., Dupleva L.S., Melnikova L.A., Artemyeva E.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://ilvm.elpub.ru/jour/article/view/660

Хранение промышленно ценных штаммов микроорганизмов является одной из стратегических задач современной науки и биологической промышленности. Производство и своевременная реализация лечебных, профилактических и диагностических препаратов против сибирской язвы способствует поддержанию стабильной эпизоотической ситуации в России по данному заболеванию. Поэтому разработка и изучение способов консервации штаммов Bacillus anthracis является важной научноисследовательской работой, позволяющей сохранять уникальные биологические свойства клеток данного возбудителя. Целью настоящей работы было изучить сохранность жизнеспособности и биологических свойств штамма Bacillus anthracis после 12 месяцев низкотемпературной консервации. В работе использовали штамм К-СТИ-79 возбудителя сибирской язвы. Штамм хранили в течение 12 месяцев при температуре минус 70 ˚С в двух криопротекторных средах: 15 % раствором глицерина с 15 % раствором глюкозы и 30 % нейтральный раствор глицерина на физиологическом растворе. По прошествии 6 и 12 месяцев хранения клетки извлекали из консервации, размораживали при 37 ˚С, делали десятикратные разведения в стерильном физиологическом растворе и высевали для определения концентрации жизнеспособных клеток. Сохранность биологических свойств возбудителя изучали согласно МУК 4.2.2413-08. В результате работы было установлено, что выбранные криопротекторы и температурный режим хранения позволил сохранить в жизнеспособном состоянии высокое количество клеток, которое статистически значимо не отличалось от исходной концентрации. Изучение биологических свойств штамма показало их соответствие паспортным данным. Проведенная работа демонстрирует возможность эффективного использования примененной схемы низкотемпературной консервации штаммов Bacillus anthracis в течение 12 месяцев.

Storage of industrially valuable strains of microorganisms is one of the strategic tasks of modern science and the biological industry. The production and timely implementation of therapeutic, preventive and diagnostic drugs against anthrax contributes to maintaining a stable epizootic situation in Russia for this disease. Therefore, the development and study of methods for storing industrially valuable strains of Bacillus anthracis is an important research work that allows preserving and preserving the unique biological properties of the cells of this pathogen. The purpose of this work was to study the preservation of the viability and biological properties of the Bacillus anthracis strain after 12 months of low-temperature preservation. The strain K-STI-79 of the causative agent of anthrax was used in the work. The strain was stored for 12 months at a temperature of minus 70 C in two cryoprotective media: 15% glycerin solution with 15% glucose solution and 30% neutral glycerin solution in saline solution. After 6 and 12 months of storage, the cells were removed from preservation, thawed at 37 C, tenfold dilutions were made in sterile saline solution and seeded to determine the concentration of viable cells. The safety of the biological properties of the pathogen was studied according to MUC 4.2.2413-08. As a result of the work, it was found that the selected cryoprotectors and the temperature regime of storage allowed to keep a high number of cells in a viable state, which did not significantly differ statistically from the initial concentration. The study of the biological properties of the strain showed their compliance with passport data. The conducted work demonstrates the possibility of effective use of the applied scheme of low-temperature preservation of Bacillus anthracis strains for 12 months.

Bacillus anthracisнизкотемпературная консервацияштаммколлекция микроорганизмовбиологические свойстваBacillus anthracislow-temperature preservationstraincollection of microorganismsbiological propertiesReferencesАнисимова Е.А. Дифференциация штаммов Bacillus anthracis на основе SNP- и VNTRполиморфизма геномов / Е.А. Анисимова, Н.А. Фахрутдинов, Д.А. Миргазов и др. // Вавиловский журнал генетики и селекции. – 2022. - №6. – С. 560-567.Anisimova E.A. Differentiation of anthrax strains based on SNP - and the results of vntr polymorphism of genomes / E.A. Anisimova, N.A. Fakhrutdinov, D.A. Mirgazov et al. // Vavilov Journal of Genetics and Breeding. – 2022. - No. 6. – pp. 560-567.Грачева И.В. Принципы формирования коллекционных фондов штаммов микроорганизмов / И.В. Грачева, А.В. Осин, В.В. Кутырев // Проблемы особо опасных инфекций. – 2021. - №2. – С. 16-23.Gracheva I.V. Principles formation of collection funds of strains of microorganisms / I.V. Gracheva, A.V. Osin, V.V. Kutyrev // Problems of especially dangerous infections. – 2021. - No. 2. – pp. 16-23.Дуплева Л.Ш. Иммунобиологические свойства ассоциированной вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота на основе антигенов бактерий Moraxella bovis и Moraxella bovoculi / Л.Ш. Дуплева, Г.Н. Спиридонов, И.Т. Хусаинов, А.Ф. Махмутов // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. – 2021. - №1. – С. 36-40.Dupleva L.S. Immunobiological properties of an associated vaccine against infectious bovine keratoconjunctivitis based on bacterial antigens Moraksellu bovis and Moraksellu bovoculi / L.S. Dupleva, G.N. Spiridonov, I.T. Khusainov, A.F. Makhmutov // Scientific notes of the Kazan State Academy of Veterinary Medicine named after N.E. Bauman. – 2021. - No. 1. – pp. 36-40.Евстифеев В.В. Оценка эффективности универсальной вакцины против хламидиоза сельскохозяйственных животных на кроликах / В.В. Евстифеев, Ф.М. Хусаинов, С.И. Яковлев // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. – 2021. - №1. – С. 41-45.Evstifeev V.V. Evaluation of the effectiveness of a universal vaccine against chlamydia of farm animals on rabbits / V.V. Evstifeev, F.M. Khusainov, S.I. Yakovlev // Scientific notes of the Kazan State Academy of Veterinary Medicine named after N.E. Bauman. – 2021. - No. 1. – pp. 41-45.Иванова С.В. Получение эритроцитарного сибиреязвенного антигена / С.В. Иванова, Л.А. Мельникова, Х.Н. Макаев и др. // Ветеринарный врач. - 2019. - №2. - С. 22-25.Ivanova S.V. Obtaining erythrocyte anthrax antigen / S.V. Ivanova, L.A. Melnikova, H.N. Makaev et al. // Veterinary doctor. - 2019. - No.2. - pp. 22-25.Иванова С.В. Применение эритроцитарного диагностикума для оценки эффективности иммунопрофилактики сибирской язвы у крупного рогатого скота / С.В. Иванова, Л.А. Мельникова, А.П. Родионов и др. // Ветеринария. - 2019. - №11. - С. 25-28.Ivanova S.V. The use of erythrocyte diagnosticum to assess the effectiveness of immunoprophylaxis of anthrax in cattle / S.V. Ivanova, L.A. Melnikova, A.P. Rodionov et al. // Veterinary Medicine. - 2019. - No. 11. - pp. 25-28.Лабораторная диагностика и обнаружение возбудителя сибирской язвы: Методические указания. – М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора. 2009. – 69 с.Laboratory diagnostics and detection of the causative agent of anthrax: Guidelines. – M.: Federal Center for Hygiene and Epidemiology of Rospotrebnadzor. 2009. – 69 p.Похиленко В.Д., Методы длительного хранения коллекционных культур микроорганизмов и тенденции развития / В.Д. Похиленко, А.М. Баранов, К.В. Детушев // Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Медицинские науки. - 2009. - № 4. - С. 99-121.Pokhilenko V.D., Methods of long-term storage of collection cultures of microorganisms and development trends / V.D. Pokhilenko, A.M. Baranov, K.V. Detushev // Izvestia of higher educational institutions. Volga region. Medical sciences. - 2009. - No. 4. - pp. 99-121.Салмаков К.М. Сравнительное изучение иммуногенных свойств живых и инактивированных противобруцеллезных вакцин при ревакцинации овец / К.М. Салмаков, А.М, Фомин, Г.М. Сафина и др. // Ветеринарный врач. – 2013. - №4. – С. 5-8.Salmakov K.M. Comparative study of immunogenic properties of live and inactivated brucellosis vaccines during sheep revaccination / K.M. Salmakov, A.M., Fomin, G.M. Safina et al. // Veterinary doctor. – 2013. - No. 4. – pp. 5-8.Хузин Д.А. Разработка и апробация экспериментальных серий вакцин против некробактериоза / Д.А. Хузин, Н.В. Мельник, Д.Н. Латфуллин // Вестник Омского государственного аграрного университета. – 2019. - №4. – С. 146-153.Khuzin D.A. Development and approbation of experimental series of vaccines against necrobacteriosis / D.A. Khuzin, N.V. Melnik, D.N. Latfullin // Bulletin of Omsk State Agrarian University. – 2019. - No. 4. – pp. 146-153.Шевцов А.Н. Вклад военных ученых в создании вакцинно-сывороточных препаратов против сибирской язвы / А.Н. Шевцов, О.В. Коротышев, Р.Ш. Зиганшин и др. // Вестник войск РХБ защиты. – 2021. - №4. – С. 384-396.Shevtsov A.N. Contribution of military scientists in the creation of vaccine-serum preparations against anthrax / A.N. Shevtsov, O.V. Korotyshev, R.Sh. Ziganshin et al. // Bulletin of the Troops of the Russian Defense Forces. – 2021. - No. 4. – pp. 384-396.Cui S. Improving the survival of Lactiplantintibacillus plantarum during lyophilization based on the regulation of cell membranes / S. Cui, K. Hu, Z. Qian et al. // Microorganisms. – 2022. - №10. – Р. 1985.Cui S. Improving the survival of Lactiplantintibacillus plantarum during lyophilization based on the regulation of cell membranes / S. Cui, K. Hu, Z. Qian et al. // Microorganisms. – 2022. - №10. – Р. 1985.Fissor D. Freeze drying and analytical technologies for pharmaceuticals / D. Fissor, T. McCoy // Frontiers in chemistry. – 2018. – 6. P. 622.Fissor D. Freeze drying and analytical technologies for pharmaceuticals / D. Fissor, T. McCoy // Frontiers in chemistry. – 2018. – 6. P. 622.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.