Длительное применение антибиотиков одного класса приводит к формированию устойчивых популяций возбудителей инфекций, этиология которых часто обусловлена резистентными формами и видами патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. Факторами, способствующими возникновению резистентности у бактерий, являются циклическое применение антибиотиков одного класса, использование неспецифичных, низкоэффективных антибиотиков, выбор препарата без учета локализации воспалительного процесса и видовой принадлежности возбудителя, несоблюдение дозировки и длительности курса лечения и др. Для проявления бактерицидного действия антимикробного препарата в отношении резистентных штаммов микроорганизмов необходима концентрация активного вещества выше, чем терапевтическая доза. Основной причиной формирования резистентности бактерий ко многим применяемым антимикробным препаратам является получение ими при конъюгации от других бактерий R-плазмид, несущих в себе гены устойчивости к антибиотикам, которые способны передаваться от одной бактерии к другой, формируя резистентность у всей популяции. Перспективным направлением в решении проблемы снижения формирования резистентности у бактерий является создание комплексных препаратов, содержащих компоненты с разным механизмом и спектром антимикробного действия. Лабораторные исследования были проведены на различных клонах штамма E. coli 866, устойчивых к разработанным ранее комплексным антимикробным препаратам и составляющим их активно действующим веществам. После каждых десяти пассажей методом серийных разведений осуществляли изучение антимикробной активности препаратов в отношении указанных микроорганизмов. Выделение плазмидной ДНК из бактериальных клеток производили методом щёлочного лизиса и последующим связыванием на селективных мембранах микроспиновых колонок с использованием набора для выделения плазмидной ДНК. Выделение суммарной клеточной РНК осуществляли методом фенол-хлороформной экстракции с использованием гуанидинизоционата в качестве хаотропного агента с последующей очисткой лизата на микроспиновых колоноках. Амплификация фрагментов изучаемых генов осуществляли по схеме трёхшаговой полимеразной цепной реакции. Число циклов амплификации - 55. Проведенными исследованиями установлено, что разработанный комплексный препарат на основе апрамицина и цефотаксима обладает выраженной антимикробной активностью в отношении потенциальных возбудителей желудочно-кишечных и респираторных болезней животных. Установлено, что формирование резистентности штамма E. coli 866 к цефотаксиму и апрамицину, а также к комплексному препарату на их основе сопровождается значительными изменениями в функционировании генетического аппарата бактериальной клетки. нимают участие вирусы, бактерии, хламидии и другие возбудители как в отдельности, так, и чаще всего, в различных ассоциациях, что способствует более выраженному проявлению патологии
Prolonged use of antibiotics of one class leads to the formation of stable populations of infectious agents, the etiology of which is often due to resistant forms and types of pathogenic and opportunistic microorganisms. Factors contributing to the emergence of antibacterial resistance are the cyclic use of antibiotics of one class, the use of nonspecific, low-performance antibiotics, the choice of the drug without taking into account the localization of the inflammatory process and species of the causative agent, failure to comply with the dosage and duration of the course of treatment, etc. To demonstrate the bactericidal effect of the antimicrobial drug against resistant strains of microorganisms, the concentration of the active substance is higher than therapeutics The main reason for the formation of bacterial resistance to many antimicrobial drugs used is the preparation of R-plasmids conjugated from other bacteria carrying antibiotic resistance genes that are capable of transferring from one bacterium to another, forming resistance in the whole population. A promising direction in solving the problem of reducing the formation of resistance in bacteria is the creation of complex preparations containing components with different mechanisms and spectrum of antimicrobial action. Laboratory studies were conducted on various clones of the E. coli strain 866, resistant to previously developed complex antimicrobial agents and active ingredients that make up them. After every ten passages, the method of serial dilutions was used to study the antimicrobial activity of the preparations with respect to these microorganisms. Isolation of plasmid DNA from bacterial cells was performed by alkaline lysis and subsequent binding on selective membranes of microspin columns using a plasmid DNA extraction kit. Isolation of total cellular RNA was carried out by phenolchloroform extraction using guanidinisocyanate as a chaotropic agent followed by purification of the lysate on microspin columns. Amplification of fragments of the studied genes was carried out according to the three-step polymerase chain reaction scheme. The number of amplification cycles was 55. The conducted studies showed that the developed complex preparation based on apramycin and cefotaxime has a pronounced antimicrobial activity against potential causative agents of gastrointestinal and respiratory diseases of animals. It was found that the formation of resistance of E. coli 866 strain to cefotaxime and apramycin, as well as to the complex preparation on their basis, is accompanied by significant changes in the functioning of the genetic apparatus of the bacterial cell.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.