Хранение штамма Bacillus anthracis методом низкотемпературной консервации

Хранение промышленно ценных штаммов микроорганизмов является одной из стратегических задач современной науки и биологической промышленности. Производство и своевременная реализация лечебных, профилактических и диагностических препаратов против сибирской язвы способствует поддержанию стабильной эпизоотической ситуации в России по данному заболеванию. Поэтому разработка и изучение способов консервации штаммов Bacillus anthracis является важной научноисследовательской работой, позволяющей сохранять уникальные биологические свойства клеток данного возбудителя. Целью настоящей работы было изучить сохранность жизнеспособности и биологических свойств штамма Bacillus anthracis после 12 месяцев низкотемпературной консервации. В работе использовали штамм К-СТИ-79 возбудителя сибирской язвы. Штамм хранили в течение 12 месяцев при температуре минус 70 ˚С в двух криопротекторных средах: 15 % раствором глицерина с 15 % раствором глюкозы и 30 % нейтральный раствор глицерина на физиологическом растворе. По прошествии 6 и 12 месяцев хранения клетки извлекали из консервации, размораживали при 37 ˚С, делали десятикратные разведения в стерильном физиологическом растворе и высевали для определения концентрации жизнеспособных клеток. Сохранность биологических свойств возбудителя изучали согласно МУК 4.2.2413-08. В результате работы было установлено, что выбранные криопротекторы и температурный режим хранения позволил сохранить в жизнеспособном состоянии высокое количество клеток, которое статистически значимо не отличалось от исходной концентрации. Изучение биологических свойств штамма показало их соответствие паспортным данным. Проведенная работа демонстрирует возможность эффективного использования примененной схемы низкотемпературной консервации штаммов Bacillus anthracis в течение 12 месяцев.

1. Анисимова Е.А. Дифференциация штаммов Bacillus anthracis на основе SNP- и VNTRполиморфизма геномов / Е.А. Анисимова, Н.А. Фахрутдинов, Д.А. Миргазов и др. // Вавиловский журнал генетики и селекции. – 2022. - №6. – С. 560-567.

2. Грачева И.В. Принципы формирования коллекционных фондов штаммов микроорганизмов / И.В. Грачева, А.В. Осин, В.В. Кутырев // Проблемы особо опасных инфекций. – 2021. - №2. – С. 16-23.

3. Дуплева Л.Ш. Иммунобиологические свойства ассоциированной вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота на основе антигенов бактерий Moraxella bovis и Moraxella bovoculi / Л.Ш. Дуплева, Г.Н. Спиридонов, И.Т. Хусаинов, А.Ф. Махмутов // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. – 2021. - №1. – С. 36-40.

4. Евстифеев В.В. Оценка эффективности универсальной вакцины против хламидиоза сельскохозяйственных животных на кроликах / В.В. Евстифеев, Ф.М. Хусаинов, С.И. Яковлев // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. – 2021. - №1. – С. 41-45.

5. Иванова С.В. Получение эритроцитарного сибиреязвенного антигена / С.В. Иванова, Л.А. Мельникова, Х.Н. Макаев и др. // Ветеринарный врач. - 2019. - №2. - С. 22-25.

6. Иванова С.В. Применение эритроцитарного диагностикума для оценки эффективности иммунопрофилактики сибирской язвы у крупного рогатого скота / С.В. Иванова, Л.А. Мельникова, А.П. Родионов и др. // Ветеринария. - 2019. - №11. - С. 25-28.

7. Лабораторная диагностика и обнаружение возбудителя сибирской язвы: Методические указания. – М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора. 2009. – 69 с.

8. Похиленко В.Д., Методы длительного хранения коллекционных культур микроорганизмов и тенденции развития / В.Д. Похиленко, А.М. Баранов, К.В. Детушев // Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Медицинские науки. - 2009. - № 4. - С. 99-121.

9. Салмаков К.М. Сравнительное изучение иммуногенных свойств живых и инактивированных противобруцеллезных вакцин при ревакцинации овец / К.М. Салмаков, А.М, Фомин, Г.М. Сафина и др. // Ветеринарный врач. – 2013. - №4. – С. 5-8.

10. Хузин Д.А. Разработка и апробация экспериментальных серий вакцин против некробактериоза / Д.А. Хузин, Н.В. Мельник, Д.Н. Латфуллин // Вестник Омского государственного аграрного университета. – 2019. - №4. – С. 146-153.

11. Шевцов А.Н. Вклад военных ученых в создании вакцинно-сывороточных препаратов против сибирской язвы / А.Н. Шевцов, О.В. Коротышев, Р.Ш. Зиганшин и др. // Вестник войск РХБ защиты. – 2021. - №4. – С. 384-396.

12. Cui S. Improving the survival of Lactiplantintibacillus plantarum during lyophilization based on the regulation of cell membranes / S. Cui, K. Hu, Z. Qian et al. // Microorganisms. – 2022. - №10. – Р. 1985.

13. Fissor D. Freeze drying and analytical technologies for pharmaceuticals / D. Fissor, T. McCoy // Frontiers in chemistry. – 2018. – 6. P. 622.